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1高效液相色谱法测定酶的活性显示文摘3β,20α-羟基甾体脱氢酶(3β,20α-HSD)是和胚胎的发育密切相关的;我们于1987年首次从胎羊血中得到该酶的纯品,并对其有关性质进行了研究。但是繁杂的测酶活方法常常延误研究工作的顺利进行,因此寻求一种简便有效的测定方法是很有意义的。经多次实验,我们成功地将高效液相色谱技术(HPLC)用于3β,20α-HSD的活性测定,大大缩短了测定时间,促进了有关研究工作的顺利进行。本文将介绍这种新的测酶活方法。陈清轩 Leonard O.Rosik Frederick Sweet 1992色谱1992,10,2:2
2Complete 1H and 13C NMR Spectra of pregnenolone显示文摘Zsuzsa Szendi Peter Forgo Frederick Sweet 1995Stefiods1995,60,:1
3Complete 1H and 13 CNMR spectra of pregnenolone显示文摘 Peter Forgo Frederick Sweet 1995Steroids1995,60,6:1
43β,20α-羟基甾体脱氢酶的动力学性质显示文摘3β,20α-羟基甾体脱氢酶(3β,20α-Hydroxysteroid dehydrogenase,3β,20α-HSD)是从胎羊血中分离得到的。分子量为35kD。该酶以NADPH为辅酶,有两种底物。以孕酮为底物时,Km=30.8μmol/L,Vmax=0.7nmol min^(-1)(nmol enzyme)^(-1);以5α-二氢睾酮(5α-Dihydrotestosterone,5α-DHT)为底物时,Km=74μmol/L,Vmax=1.3nmol min^(-1)(nmol enzyme)^(-1)。5α-DHT竞争性抑制20α-还原活性,Ki=102μmol/L。16α-溴代乙酰氧基(16α-Bromo acetoxyprogesterone,16α-BAP)是3β,20α-HSD不可逆竞争性抑制剂,t_(1/2)=75min。对3β和20α还原活性的抑制常数Ki分别为23μmol/L和58μmol/L。陈清轩 Colin D.Nancarrow Frederick Sweet 1991生物化学杂志1991,7,2:0
5胎羊3β,20α-羟类甾醇氧化还原酶活性位点的组氨酸残基的鉴定显示文摘为进一步研究胎羊3β,20α-羟类甾醇氧化还原酶活性中心的特性,我们合成了放射性的16α-溴乙酸基孕酮和5α-二氢睾酮-17-溴乙酸酯作为亲和标记试剂。二者都是以不可逆的方式,活性位点定向地竞争性抑制酶的活性。当酶的浓度为1μmol/L,抑制剂的浓度为100μmol/L时,使酶失去一半活性所需时间(t_(0.5))分别为75 min(16α-BAP)和480 min(5α-DTB)。当在反应混合液中有底物孕酮或5α-二氮睾酮存在时,可降低抑制剂对酶活性的抑制速度。把标记的酶用盐酸水解,用氨基酸分析仪进行分析,最后确定,位于酶的活性中心的被标记氨基酸为组氨酸,它可能在氧化还原反应过程中发挥着重要作用。陈清轩 FREDERICK SWEET 1991生物化学与生物物理进展1991,18,2:0
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