| 2 | miR-155对乙型肝炎病毒复制及PTEN表达的影响显示文摘目的构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155,探讨其在乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠中对HBV复制及PTEN基因表达的调控作用。方法PCR扩增mmu-miR-155的前体基因片段(pre-mmu-miR-155),双酶切后连接到pmR-mCherry载体上,通过菌落PCR、双酶切和测序验证重组载体的准确性。将重组载体采用高压尾静脉法注入HBV转基因小鼠体内作为实验组,同时设空质粒组(注入pmR-mCherry空质粒)、空白组(注入等体积磷酸盐缓冲液),7d后qPCR检测各组细胞miR-155的表达情况,14d采用酶联免疫吸附法检测干扰素(IFN)Y表达量;1个月后qPCR检测肝内细胞因子信号抑制物(SOCS)1、PTEN基因mRNA表达量及Westernblot检测肝内socs1、PTEN、HBX蛋白表达水平。两组数据比较采用独立样本t检验;三组数据比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD法。结果经菌落PCR、双酶切和测序证实,pre-mmu-miR-155基因片段成功插入pmR-mCherry载体中。注入质粒7d后,实验组表达miR-155的水平明显升高(t=8.90,P〈0.01);注入质粒14d后,实验组IFNy表达量较空白组升高(F=26.58,P〈0.01);注入质粒30d后,实验组肝内SOCSl、PTENmRNA(FSOCSI mRNA=19.72,P〈0.01;FpTEN。RNA=7.38,P〈0.05)及蛋白表达水平(Fsocs1=50.30,P〈0.01;FPTEN=129.00,P〈0.01)均下降,同时HBX表达水平下降(FHBX=77.97,P〈0.01)。结论成功构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155,该重组载体可稳定表达mmu-miR-155;miR-155可以通过下调SOCSl表达,进而促进IFNy的表达,增强HBV转基因小鼠的抗HBV能力。与此同时,miR-155可下调PTEN的表达,有潜在的促进肝癌发生的可能。 | 谢聪 任广立 许蔓春 张卫云 张速林 蔡启茵 林永敏 Zhou Donglong | 2018 | 中华肝脏病杂志2018，26，7： | 2 |
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